克隆感受態(tài)細胞在操作時有哪些注意事項

更新時間：2024-03-20 點擊次數(shù)：978

Mach1-T1菌株由野生型non-K-12 E. Coli W菌株改造而來，是目前生長速度較快的感受態(tài)細胞之一，在平板上9h可見克隆，缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型 (recA1398)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；lacZ M15的存在使Mach1-T1可用于藍、白斑篩選；tonA突變賦予Mach1-T1菌株對噬菌體T1和T5的抗性。Mach1-T1感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>5x108 cfu/μg DNA。

注意事項：

1、感受態(tài)細胞建議在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2、混入目的DNA時應輕柔操作。

3、轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應減少最終用于涂板的菌量。

操作說明：

1.Mach1-T1感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的 DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置 25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃至少至少13h。

上一篇：發(fā)根(電擊)感受態(tài)細胞的實驗操作說明
下一篇：沒有了

聯(lián)系我們

合肥恩派爾貿(mào)易有限公司公司地址：安徽省合肥市高新區(qū)黃山路624號桑夏精英時代廣場507室技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng)

聯(lián)系人：李女士
QQ：3644884546
公司傳真：4009005473
郵箱：sale@abnbio.com

掃一掃 更多精彩

公眾號

小程序

国产又大又粗,国产中文无码AV播放,啪啪无码人妻丰满熟妇,蜜桃成熟穴视频

克隆感受態(tài)細胞在操作時有哪些注意事項